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酶学活性检测 发布于:

酶学活性检测也称为酶活测试或酶学活性检测,酶学活性测试是测试溶酶体酶活性的测试方法,溶酶体酶活性不足会导致溶酶体贮积症,常见的溶酶体贮积症有6大类30几种,溶酶体酶酶学活性测试是确诊溶酶体贮积症的金标准。常见的溶酶体酶包括:芳基硫酸酯酶A(ASA)、半乳糖脑苷脂酶、β-半乳糖苷酶、β-氨基己糖苷酶A、总氨基己糖苷酶、β-葡萄糖苷酶、神经鞘磷脂酶、α-半乳糖苷酶、α-葡糖苷酶、α-岩藻糖苷酶、α-甘露糖苷酶、酸性型β-甘露糖苷酶、天冬氨酰氨基葡糖苷酶、α-L-艾杜糖苷酸酶、艾杜糖醛酸硫酸酯酶、乙酰肝素-N-硫酸酯酶、α-N-乙酰氨基葡糖苷酶、乙酰CoA-氨基葡糖-N-乙酰转移酶、N-乙酰氨基葡糖-6-硫酸酯酶、半乳糖-6-硫酸酯酶、β-半乳糖苷酶、芳基硫酸酯酶、β-葡糖醛酸苷酶、透明质酸酶、磷酸转移酶、棕榈酰蛋白硫脂酶、羧肽酶(TPP1溶酶体肽酶)、神经酰胺酶、唾液酸酶、酸性酯酶等等。每种酶出现活性不足都会导致一种或两种溶酶体贮积症

溶酶体贮积症是进行性疾病,随着细胞内底物的堆积,会影响到全身各个脏器,常见的症状包括:

(1)肝脾肿大、心脏功能异常、出现眼科疾病症状、面容粗陋、骨骼异常等贮积性疾病特征;

(2)智力、运动能力及发育迟缓,或早起生长发育正常继而出现进行性倒退,或伴共济失调、惊厥及无力等神经肌肉系统症状及行为异常;

(3)不能解释的肢体疼痛及骨痛。

由于症状的普遍性很容易和其他常见疾病混淆,另外同病种之间由于症状类似也容易混淆,产生误诊。

溶酶体贮积症是进行性疾病,随着患者年龄的增长,其症状逐渐严重,不及时治疗一旦形成气质性病变,病情往往难以逆转。因此,尽快进行酶学活性测试以确定或排除此类疾病具有重大的临床意义。

溶酶体贮积症病种之间的症状也交织在一起,如下表:

临床表现

涉及病种

特殊面容

神经节苷脂沉积病(GM1、GM2、Sandhoff病)、黏多糖贮积症、甘露糖苷贮积症、岩藻糖苷贮积症、天冬氨酰葡萄糖胺尿症、唾液酸沉积症、黏脂贮积症Ⅱ、III型

肝脾肿大

神经节苷脂沉积病(GM1、GM2、Sandhoff病)、戈谢病、尼曼-匹克病、Farber病、黏多糖贮积症多型、天冬氨酰葡萄糖胺尿症、黏脂贮积症Ⅱ、III型、多种硫酸酯酶缺乏症

眼部病症

神经节苷脂沉积病(GM1、GM2、Sandhoff病)、异染性脑白质营养不良(MLD)、Krabbe脑白质营养不良、戈谢病、法布里病、Farber病、黏多糖贮积症多型、NCL、唾液酸沉积症、黏脂贮积症Ⅱ、III型、多种硫酸酯酶缺乏症

心脏异常

法布里病、庞贝氏症、黏多糖贮积症多型、岩藻糖苷贮积症、天冬氨酰葡萄糖胺尿症、黏脂贮积症Ⅱ、III型

血小板低

戈谢病、

肢体疼痛或骨痛

戈谢病、法布里病

智力、运动能力及发育迟缓

戈谢病、神经节苷脂沉积病、庞贝氏症、黏多糖贮积症多型、岩藻糖苷贮积症、天冬氨酰葡萄糖胺尿症、尼曼-匹克病

因此,为了尽快进行临床确诊,在做溶酶体酶酶学活性测试通常需要测试几种酶才能确定一个病。

测试采用荧光法,需要经过以下流程:

(1)采血

通常情况下采患者静脉血5ml,采用EDTA抗凝血。但也有部分酶可采用干血片的测试方法(北京中科医学检验及上海新华医院),干血片只需要患者几滴血即可完成,但这种方法通常需要对疑似患者做进一步遗传学分析。

(2)患者填写知情同意书

(3)对样本进行处理,分离白细胞。

(4)对白细胞进行处理,分离底物。

(5)加入试剂对分离物进行处理。

(6)用荧光法进行测试。

(7)计算酶活性。

(8)对计算结果进行解读,确定是否在正常范围内。

(9)做出检验报告。

酶学活性测试过程复杂,涉及多种技术,没有现成的成套设备自动化处理,因此国内可以很少实验室可以完成,相对检测成本较高。


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